PCR實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)

　　標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域：

　　N1.試劑配制區(qū);

　　N2.樣品處理區(qū);

　　N3.核酸擴(kuò)增區(qū);

　　N4.產(chǎn)品分析區(qū);

　　如果使用全自動(dòng)分析儀，該區(qū)域可適當(dāng)合并。

　　(進(jìn)入每個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照一個(gè)方向進(jìn)行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服，如不同的顏色。工作人員離開(kāi)工作區(qū)時(shí)，不得帶出工作服)

　　PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局

　　各區(qū)功能分別為

　　試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的制備、分裝、保存。

　　樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝、核酸提取、保存和加樣。

　　擴(kuò)增產(chǎn)品分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)品的測(cè)定、結(jié)果分析、登記及報(bào)告。

　　擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開(kāi)，必須使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔。

　　少量試劑可在樣品處理區(qū)配制。

　　樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)在滿(mǎn)足下列操作和清潔處理要求的前提下，可設(shè)置在同一房間：

　　在生物安全柜內(nèi)操作;

　　每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員。實(shí)驗(yàn)組分別使用自己的試劑和耗材;

　　儲(chǔ)存污染物的器皿應(yīng)密封并一次性使用;

　　實(shí)驗(yàn)前后對(duì)操作區(qū)域和共享設(shè)備進(jìn)行清潔消毒。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)規(guī)劃要點(diǎn)。

　　1.主體結(jié)構(gòu)：

　　主體為彩鋼板。鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角和陽(yáng)角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，解決易污染、積塵、不易清洗等問(wèn)題。結(jié)構(gòu)牢固，線(xiàn)條簡(jiǎn)潔，美觀大方，密封性好。

　　2.標(biāo)準(zhǔn)三區(qū)分隔及氣壓調(diào)節(jié)：

　　PCR過(guò)程分為三個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)區(qū)：試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增試驗(yàn)。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體的緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)區(qū)都有一個(gè)緩沖區(qū)。同時(shí)，通過(guò)氣壓調(diào)節(jié)，試劑和標(biāo)本在整個(gè)PCR試驗(yàn)過(guò)程中免受氣溶膠污染，減少擴(kuò)增產(chǎn)品對(duì)人員和環(huán)境的污染。

　　緩沖區(qū)一、緩沖區(qū)二、PCR擴(kuò)增區(qū)排氣扇可打開(kāi)，試驗(yàn)區(qū)外墻和門(mén)上安裝可調(diào)回風(fēng)口，空氣通過(guò)回風(fēng)口進(jìn)入室內(nèi)通風(fēng)。

　　3.消毒：

　　紫外線(xiàn)燈安裝在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)、三個(gè)緩沖區(qū)的頂部和傳送窗內(nèi)進(jìn)行消毒。

　　移動(dòng)紫外線(xiàn)燈也設(shè)置在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)，對(duì)試驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。

　　4.機(jī)械連鎖不銹鋼傳輸窗：

　　試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖)傳輸窗口傳輸，確保試劑和標(biāo)本在傳輸過(guò)程中不受污染(人物分流)

　　5.地面。

　　地面建議采用聚氯乙烯卷材地面或自流平地面，完整性好。易于清潔，耐腐蝕。無(wú)條件的，水磨石地面或大瓷磚(至少800mm×800mm)接縫應(yīng)小于2mm。

　　6.照明。

　　燈具應(yīng)選用凈化燈具，可達(dá)到易清洗、無(wú)塵的特點(diǎn)。

　　在施工過(guò)程中要注意。

　　●標(biāo)準(zhǔn)化的安裝流程和全面的服務(wù)流程。

　　●嚴(yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程。

　　●安裝前需要確定以下安裝條件，如:電源電壓、電源進(jìn)線(xiàn)位置、電話(huà)網(wǎng)線(xiàn)進(jìn)線(xiàn)位置、進(jìn)水水壓、安裝空間相對(duì)較小、地面平整度、通風(fēng)孔、進(jìn)水管、下水管位置等。、理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。

　　設(shè)計(jì)要點(diǎn)

　　PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散或組合的。完成一組PCR實(shí)驗(yàn)通常需要四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程：試劑準(zhǔn)備、樣品處理、核酸擴(kuò)張和產(chǎn)品分析。如果需要實(shí)驗(yàn)過(guò)程，還應(yīng)增加樣品破碎過(guò)程。

　　一、分散PCR實(shí)驗(yàn)室。

　　所謂分散PCR實(shí)驗(yàn)室，是指完成上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室相距較遠(yuǎn)，布局分散。對(duì)于這種布局形式的PCR實(shí)驗(yàn)室，由于不易相互干擾，無(wú)需特殊條件。

　　二、組合PCR實(shí)驗(yàn)室。

　　所謂組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室，是指完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室相鄰布局，形成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)的形式。對(duì)于組合形式的PCR實(shí)驗(yàn)室，由于各實(shí)驗(yàn)室的集中布局，容易相互干擾，因此對(duì)整體布局和屏障系統(tǒng)有一定的要求。每個(gè)房間都在入口處設(shè)置一個(gè)緩沖室，以減少室內(nèi)外空氣交換。

　　一些經(jīng)驗(yàn)：

　　試劑制備室和樣品處理室應(yīng)為微正壓，防止外界含有核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染;

　　通過(guò)控制進(jìn)風(fēng)量大于排風(fēng)量，可達(dá)到正壓效果。

　　核酸擴(kuò)增室和產(chǎn)品分析室應(yīng)為微負(fù)壓，防止含有核酸的氣溶膠擴(kuò)散污染試劑和樣品，通過(guò)控制排氣量大于進(jìn)氣量達(dá)到負(fù)壓效果。

　　理想情況下，PCR實(shí)驗(yàn)室緩沖室可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)氣由原中央空調(diào)控制，要求中央空調(diào)出風(fēng)口安裝在指定點(diǎn)，地面鋪設(shè)后高度為2600mm。

　　如果使用熒光PCR儀，擴(kuò)增室和產(chǎn)品分析室可以合并。

　　如果房間深度允許，可以設(shè)置PCR內(nèi)部專(zhuān)用走廊。需要指出的是，在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖房比專(zhuān)用走廊更有意義。

　　各區(qū)域之間應(yīng)有單向?qū)嶒?yàn)流程、物流、人流和氣流，形成單向工藝的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染，產(chǎn)生假結(jié)果。

　　實(shí)驗(yàn)室墻體，包括天花板，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固，氣密性好;所有陰角應(yīng)采用弧形線(xiàn)條過(guò)渡;墻體內(nèi)壁干凈，無(wú)吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應(yīng)滿(mǎn)足無(wú)縫、無(wú)滲漏、干凈、耐腐蝕的要求。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室主要設(shè)備

　　試劑準(zhǔn)備區(qū)。

　　儀器設(shè)備主要包括冰箱、超凈平臺(tái)、加樣器、混勻器、平衡和離心機(jī)、加樣器、平衡除特殊外，還應(yīng)定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈平臺(tái)上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。混合物應(yīng)與分子生物學(xué)進(jìn)行比較。試劑準(zhǔn)備好后，應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢查：一是是否有污染。二是檢測(cè)試劑的擴(kuò)增效果。

　　標(biāo)本制備區(qū)。

　　儀器設(shè)備主要包括生物安全柜、加樣器、離心機(jī)、溫育器、混勻器等。

　　擴(kuò)增區(qū)

　　擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增器、超凈臺(tái)、微量取樣器、離心機(jī)和移動(dòng)紫外線(xiàn)燈。擴(kuò)增器需要校準(zhǔn)。并配備UPS電源，防止電壓波動(dòng)對(duì)擴(kuò)增效果的影響。

　　分析區(qū)

　　本區(qū)域使用的儀器設(shè)備包括酶標(biāo)記儀、洗板機(jī)、取樣器、水浴箱等潔凈實(shí)驗(yàn)區(qū)的緩沖區(qū)，部分面積不得超過(guò)主實(shí)驗(yàn)室的八分之一，有規(guī)定。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室不容忽視的瑣碎設(shè)計(jì)

　　1.實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但為了避免各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間交叉污染的可能性，應(yīng)采用全排氣的氣流組織形式。同時(shí)，嚴(yán)格控制輸送和排氣，確保各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

　　2.污染防治。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的污染類(lèi)型有以下幾種物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染和標(biāo)本之間的污染。一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)必須停止，直到找到污染源，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須無(wú)效，需要重新實(shí)驗(yàn)。因此，圍繞實(shí)驗(yàn)室尋找污染源既耗時(shí)又繁瑣，浪費(fèi)人力物力。因此，要避免污染，首先要預(yù)防，而不是排除。

　　嚴(yán)格管理PCR實(shí)驗(yàn)室不可或缺。

　　(1)嚴(yán)格控制進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的人員。與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室。如果條件允許，應(yīng)設(shè)置獨(dú)立通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的門(mén);

　　(2)盡量減少實(shí)驗(yàn)區(qū)不必要的行走，以減少交叉污染的可能性。

　　(3)擴(kuò)增產(chǎn)品分析區(qū)是擴(kuò)增產(chǎn)品污染的主要來(lái)源。廢液不能倒入實(shí)驗(yàn)室。消毒劑浸泡消毒后，必須遠(yuǎn)離實(shí)驗(yàn)室。吸頭等一次性材料也應(yīng)用消毒劑浸泡消毒，如焚燒;

　　(4)擴(kuò)展產(chǎn)品分析區(qū)可能使用一些可能引起基因突變和有毒物質(zhì)的物質(zhì)，應(yīng)特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全保護(hù)。3.5實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)室內(nèi)容配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、取樣器等。

　　》》需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室裝修設(shè)計(jì)，歡迎致電廣州卓平實(shí)驗(yàn)室。