為什么PCR實驗室要分區(qū)隔離?

　　依據(jù)國家法規(guī)，在專業(yè)的PCR實驗(比如臨床PCR檢驗實驗室)室通常需要做到四區(qū)隔離(或至少是三區(qū)隔離)的要求。

　　一般常見的三區(qū)指的是：

　　1.試劑配制區(qū)：PCR反應(yīng)系統(tǒng)配制區(qū)。

　　2.標(biāo)本處理區(qū):包括擴展模板的制備，也就是我們經(jīng)常提取DNA的地方;3.PCR擴增和產(chǎn)品分析區(qū)域:PCR擴增區(qū)域，也是凝膠電泳分析擴增產(chǎn)品區(qū)域。

　　如果細分PCR擴展區(qū)和產(chǎn)品分析區(qū)，則為典型的四區(qū)隔離。四區(qū)隔離的主要目的是防止氣溶膠在各PCR區(qū)域之間流動。為了避免相互污染，可以為不同區(qū)域設(shè)置正負壓：

　　1.試劑準(zhǔn)備區(qū)(一區(qū)):最干凈的區(qū)域，保持微正壓，防止外部空氣進入隔離污染源。此外，陰性模板應(yīng)添加PCR管并覆蓋在該區(qū)域，嚴(yán)禁在該區(qū)域打開。儲存帶有DNA模板的離心管;

　　2.增加DNA模板(ⅱ區(qū))：保持微負壓，確保內(nèi)部空氣不泄漏，避免陽性模板的氣溶膠污染外部環(huán)境。

　　3.擴增及PCR產(chǎn)品分析區(qū)(三區(qū))：保持微負壓，使內(nèi)部空氣不泄漏，避免擴增產(chǎn)物的氣溶膠污染外部環(huán)境。

　　在進入PCR實驗室時，需要遵循一個方向進行操作不能逆向進行。

　　否則，可能會產(chǎn)生氣溶膠污染和假陽性結(jié)果!因此，在PCR實驗室投入使用之前，必須先通過國家授權(quán)的檢測機構(gòu)進行檢測，取得PCR實驗室檢測合格報告，然后在正常使用前進行徹底消毒。

PCR實驗室污染怎么辦?

　　在生物實驗室中，污染總是不可能預(yù)防的，安靜的，虛假的陽性結(jié)果使無數(shù)的實驗室人員瘋狂和崩潰。如何避免實驗室污染是首要任務(wù)。大多數(shù)生物學(xué)實驗都是基于細胞、分子和蛋白質(zhì)水平的微觀實驗。這些微樣本對外部環(huán)境的影響很敏感，環(huán)境中的雜質(zhì)污染。試劑和儀器的交叉污染。產(chǎn)品氣溶膠污染等，將對實驗結(jié)果產(chǎn)生負面影響。

　　首先，我們需要了解哪些常見的污染源?

　　交叉污染樣本?試劑交叉污染?克隆顆粒污染?PCR擴張產(chǎn)品污染?氣溶膠污染。

　　如何防止PCR實驗室污染？

　　(一)實驗室分區(qū)合理。

　　實驗室各工作區(qū)的實驗用品，包括移液器，應(yīng)專門使用。如果可能，PCR試劑應(yīng)放置在配有紫外線燈的層流工作臺(如生物安全柜和超凈工作臺)中。PCR專業(yè)微量離心機應(yīng)放置在工作臺內(nèi)。一次性手套。每個范圍內(nèi)的液體轉(zhuǎn)移器和其他必要物品。

　　(二)實驗操作正確。

　�、貾CR試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求進行，樣品應(yīng)緩慢，盡量一次完成，避免多次吸煙，避免交叉污染或氣溶膠污染。在實驗過程中，手套應(yīng)經(jīng)常更換。進出不同區(qū)域或模板后，應(yīng)及時更換手套。

　�、谂鋫銹CR試劑的微量離心管應(yīng)在打開前進行瞬時離心(約10秒)，將管壁和管蓋上的液體拋到管底，以減少污染手套或添加樣品的機會。打開管道的動作要輕，防止管道中的液體濺出或形成氣溶膠，造成污染。

　�、弁瑫r進行多個PCR反應(yīng)時，應(yīng)制備主反應(yīng)混合物，然后將其分裝到PCR反應(yīng)管中。zui后，添加樣品核酸模板，以減少繁瑣的單次添加操作造成的污染。

　　(三)實驗儀器和試劑。

　�、賹嶒炇遗渲频脑噭�，如去離子水、緩沖液等，在使用前應(yīng)進行高壓滅菌或過濾滅菌。

　　②單獨包裝PCR試劑:所有PCR試劑均應(yīng)單獨包裝，以減少重復(fù)取樣次數(shù)，并保存在-20℃。此外，PCR試劑。PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)品分開保存，不得放在同一個冰箱或冰箱中。

　�、鬯�有吸頭、反應(yīng)管等應(yīng)一次使用，使用前應(yīng)進行高壓處理。如果條件允許，最好使用帶過濾器的槍頭。

　�、苊總�工作區(qū)域的移液器要有標(biāo)識，要固定使用，不能交叉使用。

　　(四)實驗設(shè)計。

　　實驗設(shè)計應(yīng)遵循實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的有關(guān)規(guī)定，至少在實驗中：

　�、僭O(shè)置目標(biāo)DNA陽性對照反應(yīng)。實驗前應(yīng)在實驗室的其他位置進行目標(biāo)序列的適當(dāng)稀釋，以防止目標(biāo)DNA的濃縮溶液被帶到實驗室進行PCR的特殊位置。

　　②設(shè)置PCR試劑陰性對照和目標(biāo)DNA陰性對照。

　　實驗室的合理設(shè)計與建設(shè)是順利進行PCR實驗的基礎(chǔ)和保障，不合理的規(guī)劃設(shè)計給后期實驗的進行帶來很多麻煩，從源頭杜絕實驗的麻煩，需要進行專業(yè)的學(xué)習(xí)。在這里提醒大家，PCR實驗室檢測是要有資質(zhì)第三方檢測公司檢測，并且提供合格的檢測報告，這樣的實驗室才能起到保護操作人員，樣品的作用!