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廣州卓平實驗室 > 行業(yè)知識 > PCR實驗室為什么要求嚴格分區(qū)
PCR實驗室常見的三個區(qū)域是指:
1.試劑配制區(qū):PCR反應系統(tǒng)配制區(qū)。
2.標本處理區(qū):包括擴增模板的制備,即我們經(jīng)常提取DNA的地方;
3.PCR擴增及產(chǎn)品分析區(qū):PCR擴增區(qū),也是擴增產(chǎn)品進行凝膠電泳分析的區(qū)域。
此外,如果PCR擴增區(qū)與產(chǎn)品分析區(qū)再次分離,則為四區(qū)隔離。
四區(qū)隔離的主要目的是防止每個PCR區(qū)域之間的氣溶膠流動——最好的方法是將每個區(qū)域分開一棟建筑,這絕對是最好的隔離措施,但操作絕對不現(xiàn)實,因此有一種方法可以為不同區(qū)域設置正負壓:
試劑配制區(qū)(一區(qū)):最干凈的區(qū)域,保持微正壓,使外界空氣無法進入隔離污染源。陰性模板應加入PCR管并蓋,嚴禁在該區(qū)域打開。存放帶DNA模板的離心管;
DNA模板添加區(qū)(二區(qū)):保持微負壓,保證內(nèi)部空氣不泄漏,避免陽性模板氣溶膠污染外部環(huán)境。
擴增及PCR產(chǎn)品分析區(qū)(三區(qū)):保持微負壓,防止內(nèi)部空氣泄漏,避免擴增產(chǎn)品氣溶膠污染外部環(huán)境。
操作時遵循一區(qū)→二區(qū)→三區(qū)單向,不可逆轉(zhuǎn)。
對于用于科研的PCR實驗室,如果不能滿足三區(qū)嚴格隔離的要求,至少應隔離兩區(qū):正壓區(qū)和負壓區(qū)。正壓區(qū)實施一區(qū)功能,負壓區(qū)實施二區(qū)、三區(qū)功能。
最忌諱、最可怕的是在正壓區(qū)實施三區(qū)功能。關(guān)鍵是PCR實驗室不同區(qū)域之間的空氣是否相互循環(huán)。
如果有問題,我們的實驗室沒有正負壓區(qū)分,或者全負壓,全正壓怎么辦?然后我們的建議是:不要害怕麻煩,找一個遠離三個區(qū)域的實驗室(通常打開PCR擴展產(chǎn)品的蓋子區(qū)域,如電泳區(qū))作為PCRI區(qū)域,可以節(jié)省更多的后續(xù)麻煩。
由于PCR三區(qū)隔離的目的是阻斷氣溶膠的交流,請注意以下細節(jié),思考氣溶膠來自哪里:
1.各區(qū)域應配備專用移液器,不得交叉混用。
2.各區(qū)域應配備專用移液器吸頭,不得交叉混用。
3.如果條件允許,在PCRII區(qū)工作后,需要更換實驗服、一次性鞋套、帽子、手套。
4.在PCRI區(qū)域。PCRI區(qū)備濾芯吸頭。
以上就是關(guān)于PCR實驗室要求嚴格分區(qū)的相關(guān)介紹,希望能幫助大家。
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